I.T.C. (bouillon à l’irgasan, à la ticarcilline et au chlorate de potassium)
Ce milieu est préconisé comme milieu d’enrichissement ( au même titre que le PSB) dans la norme NF V 08-027 (ISO 10273) relative aux directives générales pour la recherche des Yersinia enterolitica présumées pathogènes.
FORMULE (en g/l d’eau distillée)
1) milieu de baseTryptone : 10
Extrait de levure: 1
Magnésium chlorure hexahydraté: 60
Sodium chlorure: 5
Vert malachite, sol. Aqueuse à 0,2% 5 ml
pH= 6.9
Dissoudre les composants dans l’eau, en chauffant si nécessaire.
Répartir dans des flacons de capacité appropriée, pour obtenir les quantités nécessaires de milieu complet
2) solution de ticarcillineTicarcilline 10 mg
Eau 10 ml
Dissoudre la ticarcilline dans l’eau.
Stériliser par filtration.
3) solution alcoolique d’irgasanIrgasan 10 mg
Ethanol à 95°(V/V) 10 ml
Dissoudre l’irgasan dans l’éthanol extemporanément sinon, conserver la solution à environ –20°C pendant 4 semaines au maximum.
4) solution de chlorate de potassiumChlorate de potassium 10 g
Eau 100 ml
Dissoudre le chlorate de potassium dans l’eau.
Stériliser par filtration.
5) Milieu completMilieu de base: 988 ml
Solution de ticarcilline : 1 ml
Solution d’irgasan: 1 ml
Solution de chlorate de potassium : 10 ml
Juste avant emploi, ajouter stérilement au milieu de base refroidi à environ 45°C, les solutions de ticarcilline, d’irgasan et de chlorate de potassium et mélanger.
Répartir stérilement le milieu par quantités de 10 ml dans des tubes stériles ou de 100 ml dans des flacons stériles de capacité appropriée de manière à obtenir un rapport surface/volume minimum (anaérobie relative).
UTILISATION ET LECTUREPour préparer la première suspension initiale, introduire une quantité x de prise d’essai (masse ou volume) dans un volume connu de bouillon ITC de façon à obtenir un rapport prise d’essai/milieu d’enrichissement de 1/10). Homogénéiser la suspension en utilisant un homogénéisateur péristaltique.
Préparer la deuxième suspension initiale, en opérant de la même façon avec le bouillon PSB.
Incuber les deux suspensions initiales de la façon suivantes :
- Milieu ITC à 25 °C pendant 48 heures
- Milieu PSB à 22°C ou à 25°C pendant 48 heures à 72 heures avec agitation ou pendant 5 jours sans agitation.
A l’issue de l’incubation les milieux d’enrichissement serviront pour l’isolement et l’identification des Yersinia enterolitica présumées pathogènes.