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NITRATE Bouillon

Quel que soit le type de nitrate réductase, l’étude de la réduction des nitrates se fera par la mise en évidence des nitrites formés : ces derniers, en milieu acétique ou sulfurique, donnent une coloration rose en présence d’acide parasulfanilique ou d’alpha-naphtylamine.

Toutefois, certaines bactéries réduisent les nitrates au delà du stade “nitrite”; en conséquence, toute réaction ne développant pas de nitrites doit être complétée par l’adjonction d’un peu de poudre de zinc au milieu.

La recherche de la réduction des nitrates, soit en nitrates, soit en nitrites, soit en azote, a un grand intérêt dans la différenciation des Neisseriaceae et dans celle des Pseudomonas et bactéries apparentées (bacilles gram-négatifs aérobies stricts non fermentants).

FORMULE (en g/l d’eau distillée)
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Potassium nitrate: 10
Infusion de Cerveau- Cœur: 25


Stériliser 20 minutes à 121°C.

UTILISATION ET LECTURE

Incuber le bouillon à 37°C pendant 18 à 24 heures (certaines bactéries réduisant les nitrates lentement, il peut être utile d’ensemencer un second tube pour lecture après 48 heures).
Ajouter successivement 5 gouttes de chaque réactif de Griess.
Si aucune coloration rouge n’apparaît, ajouter une pincée de poudre de zinc.

Trois réactions sont possibles:
1) Coloration rouge après addition des réactifs de Griess = réaction positive: les nitrates sont réduits en nitrite.
2) Pas de coloration rouge après addition des réactifs de Griess, ni après addition de poudre de zinc = réaction positive : les nitrates ont été réduits d’abord en nitrites, puis en azote.
3) Pas de coloration rouge après addition des réactifs de Griess, mais coloration rouge après addition de poudre de zinc = réaction négative ; les nitrates n’ont pas été réduits (ils le sont par le zinc).

NITRATE MOBILITÉ
Gélose

Ce milieu est utilisé dans le cadre de la norme NF V 08-019 (ISO 7237) visant à dénombrer les Clostridium perfringens dans les produits alimentaires ou aliments pour animaux. Il permet la recherche de la nitrate réductase et l’étude de la mobilité dans le cadre de cette norme.


FORMULE (en g/l d’eau distillée)

Peptone: 5
Extrait de viande de bœuf: 3
Galactose : 5
Glycérol : 5
Nitrate de potassium : 1
Hydrogéno-orthophosphate dissodique : 2.5
Agar : 2 à 5


Dissoudre les composants dans l’eau en portant à ébullition.
Répartir le milieu dans des tubes par quantités de ml et stériliser à 121°C pendant 15 minutes


UTILISATION ET LECTURE

Régénérer avant emploi et refroidir à température ambiante.
Ensemencer par piqûre centrale puis incuber, pour les Clostridium en anaérobiose à 35° ou 37°C durant 24 heures.

- Mobilité : Elle se traduit par un développement diffus au milieu du tube à partir de la piqûre.
- Nitrate-réductase : voir le principe à Bouillon nitrate page 125.
Les réactifs de Griess I et Griess II sont remplacés par une solution de 5-2 ANSA et une solution d’acide sulfanilique dont les composants sont en annexes.